INTRODUCTION EXPOSE BIBLIOGRAPHIQUE Généralité sur les époxydes hydrolases Epoxydes hydrolase d'Aspergillus niger Caractéristique Mécanisme enzymatique Utilisation de l'époxyde hydrolase en biocatalyse MATERIELS ET METHODES Souche Mise en culture de la souche Conservation de la souche Culture pour la production de l'activité Mesure de hydrolase Protocole Analyse Dosage des protéines Préparation de la gamme étalon Dosage des extraits enzymatique Préparation d'extrait enzymatique soluble Purification de l'EH Chromatographie sur DEAE Sépharose Chromatographie sur Phényle Sépharose Chromatographie sur Mono Q Chromatographie sur Gel Superose Test de pureté Bioconversion de l'époxyde racémique RESULTATS ET DISCUSSION Préparation d'extrait brut de l'EH d'A. niger surexprimée Purification par chromatographie Chromatographie sur DEAE Sépharose Chromatographie sur Phényle Sépharose Chromatographie sur Mono Q Chromatographie sur Gel Superose Test de pureté Caractérisation de l'époxyde hydrolase Détermination de la masse moléculaire Effet de la température Effet du pH Paramètres cinétiques et origine de l'énantiosélectivité Bioconversion de l'époxyde racémique Détermination de la régiosélectivité CONCLUSION GENERALE BIBLIOGRAPHIE
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Purification et caractérisation de l'époxyde hydrolase